siRNA
2024年06月03日
目前核酸药物主要通过反相色谱或离子交换层析纯化。
HPLC纯化是一种高效、高纯度的纯化方法，其原理基于不同物质在固定相和流动相之间的分配差异。根据寡核苷酸的特性，可以选择适合的色谱柱，如反相（RP-HPLC）或离子交换（IE-HPLC）色谱柱。对于RP-HPLC，固相中的疏水性能够很好地结合含有5'-DMT保护基团的寡核苷酸，分离度更高，可实现更高的纯度水平。
另一方面，离子交换层析，特别是阴离子交换层析，可以与带负电荷的寡核苷酸结合。通过调整盐的浓度和酸的使用，可以有效地去除杂质并分离目的寡核苷酸。但纯化后的样品可能还需要进行脱盐和浓缩，以进一步提高寡核苷酸的纯度和浓度。
结合疏水层析与离子交换层析也可以获得高纯度的原液，工艺步骤为：固相合成→疏水层析→脱三苯甲基化→离子交换→超滤/洗滤→原液。
