Sumo酶在将融合蛋白上的Sumo标签切除后,一般需要将其去除,原因如下:
1. 避免非特异性蛋白降解:Sumo酶作为半胱氨酸蛋白酶,即使完成Sumo标签切割后仍保留催化活性。若残留于样品中,可能识别并切割其他含有Sumo修饰的蛋白(如细胞内源Sumo化蛋白),导致非目标蛋白降解或功能异常。
2. 维持目标蛋白纯度与稳定性:Sumo酶分子量约45 kDa,含有His标签(商业化酶常见设计)。残留的酶分子会污染最终产物,尤其当目标蛋白需用于结构解析、药物开发或功能性实验时,杂质酶可能干扰实验结果或降低蛋白均一性。
3. 防止下游应用干扰:在酶动力学、细胞实验或动物模型中,残留Sumo酶可能持续切割实验体系中的Sumo化修饰蛋白,改变信号通路活性;另外在体内应用时,还可能诱发免疫反应。
4. 符合药用蛋白生产规范:重组蛋白药物生产中,各国药典对杂质残留有严格限制。即使微量蛋白酶也可能影响产品安全性和批间一致性,因此必须清除。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法实现高灵敏度、高特异性的Sumo酶定量检测。抗Sumo酶抗体已包被于酶标板上,按照操作顺序,向酶标板中依次加入标准品、待测样品和一抗、二抗,样本和标准品中的Sumo酶会被包被于酶标板上的抗体捕获,然后被后续加入的一抗识别,形成免疫复合物,通过洗板,游离的成分被洗去;加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗,其与一抗特异性结合,以放大检测信号,二抗与后续加入的TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)底物反应,HRP催化H2O2 氧化TMB生成蓝色产物,随后加入终止液终止酶催化反应,生成黄色产物。通过酶标仪测定450 nm OD值,Sumo酶浓度与OD450值之间呈正相关,可通过试剂盒内的标准品生成的标准曲线计算出样本中Sumo酶浓度。
本试剂盒Sumo酶残留最低检测限度0.06 ng/ml, 检测范围0.06 ng/ml-13.72 ng/ml。
• 订购信息
| 名称 | 货号 | 规格 |
Sumo酶残留检测ELISA试剂盒 | SLR01701 | 96 T |
Sumo Protease | SLP00700 | 1 mg |
SLP00701 | 10 mg | |
SLP00702 | 100 mg | |
SLP00703 | 500 mg | |
SLP00704 | 1000 mg |